人牙龈上皮细胞

| 商品属性：

| 细胞介绍：

人牙龈上皮分离自牙龈组织；牙龈是附着在牙颈和牙槽突部分的粘膜组织，呈粉红色、有光泽、质坚韧。牙龈边缘称为龈缘，正常呈月芽形。龈缘与牙颈之间的小沟称龈沟。两邻牙之间的牙龈突起称龈乳突。也叫齿龈，通称牙床；是指包住齿颈的黏膜组织，粉红色，内有很多血管和神经。牙龈上皮长期被认为是抵御口腔中持续存在的细菌的被动免疫屏障，随着对牙周致病菌的不断认识，发现牙龈上皮不仅仅是抵御微生物的物理屏障，上皮细胞还可以分泌抗菌多肽，参与先天性免疫。牙龈上皮作为牙周组织的第一道屏障，在抵御牙周炎细菌入侵的过程中发挥了重要作用，建立正常牙龈上皮细胞体外培养体系，将为各种牙龈上皮相关的研究提供稳定的实验模型。

| 方法简介：

实验室分离的人牙龈上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

| 质量检测：

实验室分离的人牙龈上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

| 培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

人牙龈上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

| 细胞培养操作：

1）复苏细胞：将含有细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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| 注意事项：

1. 收到非红系有核细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件*。若由于培养条件不*而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待ATCC CRL-1711(Sf9)细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7.该细胞仅供科研使用