人关节韧带成纤维细胞

| 商品属性：

| 细胞介绍：

人关节韧带成纤维分离自关节韧带组织；韧带是纤维结缔组织，将各个骨头在关节处连接起来，并在关节活动时加固关节稳定关节。其中颞下颌关节、踝关 节、膝关节韧带组织研究较多，颞下颌关节两侧各有三条，即颞下颌韧带、茎突下颌韧带和蝶下颌韧带。踝关节周围韧带根据其解剖位置可以分成3组，外侧韧带 ，内侧三角韧带，胫腓联合韧带。膝关节的韧带有囊外韧带和囊内韧带,其共同作用为加强关节的稳定性。囊外韧带主要有:髌韧带位于髌骨的下部，关节囊的前 方,是股四头肌肌腱的延续,向下附着于胫骨粗隆，两侧有侧副韧帶加强；囊内韧带:主要为交叉韧带:前交叉韧带附着于胫骨髁间隆起前份和股骨外侧髁的内侧面 ，防止胫骨过度前移;后交叉韧带附着于胫骨髁间隆起后份与股骨内侧髁的外侧面，防止胫骨过度后移。另外，在膝关节内尚有膝横韧带。任何关节韧带均可由于 外伤而发生损伤，但影响较大又较常见的是膝关节韧带损伤和踝关节韧带损伤。膝关节韧带损伤，常见者为膝关节侧副韧带损伤。多因膝关节微屈时，突然受到 内翻或外翻的冲击力所致。踝关节韧带损伤。多因行走或跑跳时误入不平之处所致。以外侧损伤多见。韧带是致密纤维结缔组织，主要特点是细胞、基质成分少 ，纤维非常多、纤维粗大排列紧密，且排列方向与承受张力的方向一致，有很强的保护和支持作用。韧带主要包含韧带成纤维细胞。人关节韧带成纤维对研究关节韧带损伤有重要意义。

| 方法简介：

实验室分离的人关节韧带成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

| 质量检测：

实验室分离的人关节韧带成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

| 培养信息：

培养基：基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

人关节韧带成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

| 细胞培养操作：

1）复苏细胞：将含有细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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| 注意事项：

1. 收到非红系有核细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件*。若由于培养条件不*而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待ATCC CRL-1711(Sf9)细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7.该细胞仅供科研使用