细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
人椎间盘髓核分离椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，分为中央部的髓核，富于弹性的胶状物质；周围部的纤维环，由多层纤维软骨环按同心圆排列。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。髓核，是乳白色半透明胶状体，富于弹性，为椎间盘结构的一部分，位于两软骨板与纤维环之间。由纵横交错的纤维网状结构即软骨细胞和蛋白多糖黏液样基质构成的弹性胶冻物质。婴幼儿时期的髓核含水量为80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生时体积大而松散，位于椎间盘的中央，至成年时位置移至椎间盘的中后部；在成年以前构成髓核的主要物质是大量蛋白多糖复合体、胶原纤维和纤维软骨，随着年龄的增长，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐渐减少，胶原增粗并逐渐被纤维软骨所替代。 方法简介：
公司实验室分离的人椎间盘髓核采用胶原酶-混合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的人椎间盘髓核经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 人椎间盘髓核细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 椎间盘组织 | 产品货号 | YS-01X7328 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 梭形、多角形 |
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每3-4天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 梭形、多角形 传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠肌酸激酶MB同工酶(CKMB)试剂盒 ，英文名： CKMB ELISA Kit Mouse tissue polypeptide aigen (TPA) ELISA Kit 小鼠组织多肽抗原(TPA)试剂盒 RatCalretinin,CRELISAKit 大鼠钙结合蛋白(CR)试剂盒 96T/48T 进口分装 CLIAKitforFVIIIAg(MouseFactorVIII-relatedAigen)ELISAKit小鼠第八因子相关抗原 细胞抗坏血酸比色法定量试剂盒20次 Ratmonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISAKit大鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)试剂盒规格：96T/48T 小鼠前列腺素E2 英文名称： prostaglandin E2 英文缩写： PGE2 小鼠分泌型0脂酶A2 英文名称： secretary phospholipase A2 英文缩写： sPLA2 小鼠多效生长因子 英文名称： Pleioophin 英文缩写： PTN 小鼠抑癌基因P53蛋白 英文名称： aioncogene p53 protein 英文缩写： P53 CD73单克隆抗体 小鼠神经降压肽()试剂盒 96T/48T Human membrane attack complex (MAC) ELISA Kit 人膜攻击复合物(MAC)试剂盒 HumanHighdensitylipoproteincholesterol,HDL-CELISAKit 人高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒 96T/48T 进口分装 GoatGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRP试剂盒山羊生长激素释放多肽(GHRP)试剂盒规格：96T/48T 真菌/酵母碱性焦0酸酶(AlkalinePyrophosphatase)活性比色法定量试剂盒20次 MousecoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit小鼠Ⅹ(FⅩ)试剂盒规格：96T/48T 神经迁移蛋白Slit2/3抗体 MET重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 (Fc 标签) Protein IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha 0.5mgIKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha) KB抑制蛋白α抗原 WFDC2重组人 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 Protein COL4A3BP Protein Human 重组人 COL4A3BP 蛋白 (His & GST 标签) SPN Protein Mouse 重组小鼠 SPN / CD43 蛋白 (Fc 标签) 人椎间盘髓核细胞IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha 0.5mgIKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha) KB抑制蛋白α抗原 COL4A3BP Protein Human 重组人 COL4A3BP 蛋白 (His & GST 标签) MET重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 (Fc 标签) Protein SPN Protein Mouse 重组小鼠 SPN / CD43 蛋白 (Fc 标签) WFDC2重组人 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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