细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
人羊膜成纤维分离自胎盘组织；胎盘（placenta）是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官，由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿在子宫中发育，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性。胎盘还产生多种维持妊娠的激素，是一个重要的内分泌器官。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代，胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊、鳃丝等与母体组织紧密结合，以达到母子间物质的交换，这样的结构称假胎盘。羊膜是胎盘的内层，与眼结膜组织结构相似，含有眼表上皮细胞，包括结膜细胞和角膜上皮细胞生长所需要的物质，其光滑，无血管、神经及淋巴，具有一定的弹性；在电镜下，其分为五层：上皮层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层，羊膜基底膜和羊膜羊膜基质层含有大量不同的胶元，主要为Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型胶原和纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等成份。羊膜成纤维细胞主要来自基底膜、致密层、纤维母细胞层。 方法简介：
实验室分离的人羊膜成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 质量检测：
实验室分离的人羊膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 人羊膜成纤维细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 羊膜 | 产品货号 | YS-01X7968 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息：
培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等 换液频率：每2-3天换液一次 生长特性：贴壁 细胞形态：成纤维细胞样 传代特性：可传3-5代左右 消化液：0.25% 培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 人羊膜成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠合酶运输因子(NOSIN)试剂盒 ，英文名： NOSIN ELISA Kit Mouse urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 小鼠型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)试剂盒 MouseAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 小鼠血管生成素1(ANG-1)试剂盒 96T/48T 进口分装 CLIAKitforHumanCoronavirusesIgGELISAkit人流行性乙型脑抗体IgG 细胞BTK激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次 ELISAKitBMP-2大鼠骨成型蛋白2 小鼠神经生长因子 (mouse NGF) 作用： ELISA 规格： 96T*2 美国 Chemicon 小鼠骨桥蛋白 ( mouse Osteopoin) 作用： ELISA 规格： 96T 德国 IBL 小鼠血小板衍化生长因子 (mouse PDGF-AA) 作用： ELISA 规格： 96T 美国 R&D 小鼠血小板衍化生长因子 -B(mouse PDGF-AB) 作用： ELISA 规格： 96T 美国 R&D PAM16蛋白抗体 小鼠鼠痘病毒抗体(MPV-Ab)试剂盒 96T/48T Human measles virus IgM (MV IgM) ELISA Kit 人麻疹病毒IgM(MV IgM)试剂盒 HumaalinELISAKit 人踝蛋白(talin)试剂盒 96T/48T 进口分装 Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHC试剂盒鸭主要组织相容性复合体(MHC)试剂盒规格：96T/48T 藻类细胞甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒10次 MouseCyclosporineA,CsAELISAKit小鼠A(CsA)试剂盒规格：96T/48T 腺苷三磷酸结合盒转运体12抗体 HA重组甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein PP-2A (protein phosphatase 2A 0.5mgPP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白质0酸酶-2A(抗原) USP7重组人 USP7 / HAUSP 蛋白 (aa 208-560, His & GST 标签) Protein CLIC1 Protein Human 重组人 CLIC1 蛋白 NBL1 Protein Human 重组人 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 (Fc 标签) 人羊膜成纤维细胞PP-2A (protein phosphatase 2A 0.5mgPP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白质0酸酶-2A(抗原) CLIC1 Protein Human 重组人 CLIC1 蛋白 HA重组甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein NBL1 Protein Human 重组人 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 (Fc 标签) USP7重组人 USP7 / HAUSP 蛋白 (aa 208-560, His & GST 标签) Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
|
