细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

人小气道平滑肌分离自小气道组织；临床上通常将内径小于2mm的小细支气管称为小气道。小气道具有气流阻力小，但易阻塞的特点。在平静吸气时，空气进入狭窄的鼻咽部，产生涡流。由于小气道已无软骨支持，在脱离纤维鞘嵌入肺组织后，管腔通畅性不象软骨性气道，易于受胸腔的压力变化的影响。小气道上皮细胞形成连续呼吸道内层，作为隔绝外界有害物质的物理和功能屏障发挥着的作用。小气道位于肺泡和气管的交界处，这些细胞在功能上能够调节免疫反应、产生化学因子进行宿主防御、表达粘附分子，并可能通过HLA-DR表达呈递抗原；它们还能产生液体有助于肺液的平衡。许多呼吸道疾病，如哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纤维化，都涉及呼吸道表面上皮细胞的破坏；小气道上皮细胞的培养可为防止呼吸道扩增疾病和重塑提供新的治疗选择。小气道平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。小气道的生理功能特点：①小气道阻力小；②气流速度慢；③可调节控制通气与血流比例。小气管平滑肌细胞主要功能：①保持气道张力维持小气道形态；②肺小气道进行气体交换，病变可引起换气功能障碍；③炎症、痰液阻塞或当气道外压大于气道内压时容易造成小气道闭合、萎陷。小气管平滑肌细胞与主要病生理变化：①支气管炎；②肺气肿；③慢性阻塞性肺疾病。

方法简介：

公司实验室分离的人小气道平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人小气道平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

大鼠丝蛋白结合LIM蛋白1(FBLIM1)试剂盒 ，英文名： FBLIM1 ELISA Kit

Mouse vitamin A (VA) ELISA Kit 小鼠A(VA)试剂盒

RatProgesterone,PROGELISAkit 大鼠孕激素/孕酮(PROG)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHGH(Humangrowthhormone)ELISAKIT人生长激素

细胞SPHK1激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKiX大鼠Ⅰ型胶原N末端肽

小鼠瘦素(LEP)试剂盒   96T/48T

小鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)试剂盒   96T/48T

小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin2(Eotaxin2/CCL24)试剂盒   96T/48T

小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)试剂盒   96T/48T

原钙粘附蛋白β6抗体

小鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA 试剂盒 96T/48T

One set of membrane protein (iNV) ELISA Kit 人套膜蛋白(iNV)试剂盒

Humanglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 人糖原合成酶激酶(GSK)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanbonesialoprotein,BSP试剂盒人骨涎蛋白(BSP)试剂盒规格：96T/48T

植物组织胞浆超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)分离试剂盒50次

HumanStaphylococalproteinA,SPAELISAKit人葡萄球菌蛋白A(SPA)试剂盒规格：96T/48T

RTL9蛋白抗体

HA重组甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记兔IgG(细胞流式同型对照 0.1mlRabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记兔IgG(细胞流式同型对照)

EPHB6重组人 EphB6 / EphB6 蛋白 Protein

CLCF1 Protein Human 重组人 NNT1 / CLCF1 / CLC 蛋白 (Fc 标签)

ERBB4 Protein Human 重组人 HER4 / ErbB4 蛋白 (His & Fc 标签)

人小气道平滑肌细胞Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记兔IgG(细胞流式同型对照 0.1mlRabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记兔IgG(细胞流式同型对照)

CLCF1 Protein Human 重组人 NNT1 / CLCF1 / CLC 蛋白 (Fc 标签)

HA重组甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ERBB4 Protein Human 重组人 HER4 / ErbB4 蛋白 (His & Fc 标签)

EPHB6重组人 EphB6 / EphB6 蛋白 Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。