细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
人食管癌组织源成纤维分离自食管癌组织；食管癌是常见的消化道肿瘤，每年约有30万人死于食管癌。其发病率和死亡率各国差异很大。我国是世界上食管癌高发地区之一，每年平均病死约15万人。男多于女，发病年龄多在40岁以上。食管癌典型的症状为进行性咽下困难，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，后水和唾液也不能咽下。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。 方法简介：
公司实验室分离的人食管癌组织源成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的人食管癌组织源成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 人食管癌组织源成纤维细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 食管癌组织 | 产品货号 | YS-01X7484 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠白血病抑制因子(LIF)试剂盒 ，英文名： LIF ELISA Kit Opioid receptor in mouse beta (beta -EPR) ELISA Kit 小鼠β内啡肽受体(β-EPR)试剂盒 ELISA 小鼠(mouse Fibrinogen) 进口分装 CLIAKitforIrna(HumanImmuneRNA)ELISAKit人免疫核糖核酸 通用型动物细胞周期(G1/S和G2/M期)同步(SYNCHRONY)处理试剂盒10次 ELISAKitTNF-β大鼠肿瘤坏死因子β 小鼠3(VD3)试剂盒 96T/48T 小鼠2(VD2)试剂盒 96T/48T 小鼠(VD)试剂盒 96T/48T 小鼠C(VC)试剂盒 96T/48T β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶3抗体 小鼠晚期氧化蛋白产物(AOPP)试剂盒 96T/48T Rat caspase 9 (Casp-9) ELISA Kit 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)试剂盒 HumanProteinSELISAKit 人蛋白S(ProteinS)试剂盒 96T/48T 进口分装 ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG试剂盒鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒规格：96T/48T 载玻片细胞P21蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次 Mousefreefattyacids,FFAELISAKit小鼠游离脂肪酸(FFA)试剂盒规格：96T/48T 跨膜蛋白111抗体 C2重组人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 标签) Protein 抗增生抗体靶分子1(TAPA1)重组蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1) NTF3重组人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein CEACAM5 Protein Human 重组人 CEACAM5 / CD66e 蛋白 HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 人食管癌组织源成纤维细胞抗增生抗体靶分子1(TAPA1)重组蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1) CEACAM5 Protein Human 重组人 CEACAM5 / CD66e 蛋白 C2重组人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 标签) Protein HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 NTF3重组人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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