细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

人乳腺癌成纤维分离自患有乳腺癌的女性乳腺组织；女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持机体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前，乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的乳腺癌成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的人乳腺癌成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人乳腺癌成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

大鼠单胺氧化酶(MAO)试剂盒 ，英文名： MAO ELISA Kit

Pig fat protein alpha (Lp- alpha) ELISA Kit 猪脂蛋白α(Lp-α)试剂盒

ELISA 小鼠固酮(mouse ALD)  进口分装

CLIAKitforLN(MouseLaminin)ELISAKit小鼠层连蛋白/板层素

通用型DNA克隆试剂盒(包括内切酶)10次

ELISAKitIFN-γ鸡γ干扰素

小鼠血管内皮细胞生长因子B   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor B   英文缩写：   VEGF-B

小鼠血管内皮细胞生长因子C   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor C   英文缩写：   VEGF-C

小鼠血管内皮细胞生长因子D   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor D   英文缩写：   VEGF-D

小鼠血管内皮细胞生长因子受体1   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor receptor 1   英文缩写：   VEGF-R1

DYX1C1蛋白抗体

小鼠纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat LDL-IC ELISA Kit (OFQ/N) 大鼠孤腓肽(OFQ/N)试剂盒

HumanFreeerythrocyteproloporphyrin,FEPELISAKit 人游离原卟啉(FEP)试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickenfollicle-stimulatinghormone,FSH试剂盒鸡促卵泡素(FSH)试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CASPASE-5蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MousehepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISAKit小鼠乙型肝核心抗体(HBcAb)试剂盒规格：96T/48T

电压门控钠通道5α抗体

CHL1重组小鼠 CHL-1 蛋白 Protein

滑行蛋白α(TXLNα)重组蛋白 Recombinant Taxilin Alpha (TXLNa)

STX3重组人 STX3 / Syntaxin 3 蛋白 Protein

CD9 Protein Human 重组人 CD9 / Tspan-29 蛋白

IL1R2 Protein Canine 重组狗 IL1R2 / IL1RB 蛋白 (Fc 标签)

人乳腺癌成纤维细胞滑行蛋白α(TXLNα)重组蛋白 Recombinant Taxilin Alpha (TXLNa)

CD9 Protein Human 重组人 CD9 / Tspan-29 蛋白

CHL1重组小鼠 CHL-1 蛋白 Protein

IL1R2 Protein Canine 重组狗 IL1R2 / IL1RB 蛋白 (Fc 标签)

STX3重组人 STX3 / Syntaxin 3 蛋白 Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。