细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
人膀胱平滑肌分离自膀胱组织；膀胱是主要由平滑肌细胞组成的中空器官，膀胱平滑肌的舒张和收缩使得膀胱分别储存和排出尿液。膀胱平滑肌细胞表型的调控和可诱导一氧化氮合酶的表达与多种病理状况有关，包括膀胱功能障碍。研究表明，组织缺氧抑制膀胱平滑肌细胞的增殖，膀胱平滑肌细胞的分化依赖于膀胱上皮细胞释放的因子。膀胱平滑肌细胞外基质的分泌表型可通过细胞所经历的机械变形频率而改变。平滑肌是许多疾病中的共同路径，因此，了解在疾病发生及持续过程中平滑肌怎样变化，这是治疗方法取得进展的重要一步。膀胱壁由三层组织组成，由内而外为黏膜层、肌层和外膜。其中，肌层主要由平滑肌构成。膀胱平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。体外培养膀胱平滑肌细胞不仅为组织工程膀胱、尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基础与前提。 方法简介：
公司实验室分离的人膀胱平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的人膀胱平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 人膀胱平滑肌细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 膀胱组织 | 产品货号 | YS-01X7256 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠降解产物(FDP)试剂盒 ，英文名： FDP ELISA Kit Pla zeatin riboside (ZR) ELISA Kit 植物玉米素核苷(ZR)试剂盒 Mousemacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 小鼠巨噬细胞性蛋白5(MIP-5)试剂盒 96T/48T 进口分装 CLIAKitforHumanadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit人晚期糖基化终末产物 细胞HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR扩增试剂盒20次 ELISAKitC3a大鼠补体片断3a 小鼠牙本质涎0蛋白 英文名称： Mouse Dein Sialophosphoprotein 英文缩写： DSP 小鼠DNA抗体 英文名称： Mouse Deoxyribonucleic Acid Aibody 英文缩写： DNA.Ab 小鼠氧化酶 英文名称： Mouse Diamine Oxidase 英文缩写： DAO 小鼠多巴胺受体D1 英文名称： Mouse Dopamine receptor D1 英文缩写： DRD1 6号染色体开放阅读框72抗体 小鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA 试剂盒 96T/48T Rat calmodulin (CAM) ELISA Kit 大鼠钙调素(CAM)试剂盒 Humanverylateappearingaigen,VLAELISAKit 人迟现抗原(VLA)试剂盒 96T/48T 进口分装 C3试剂盒鲑鱼补体蛋白3规格：96T/48T 鱼类受精卵细胞冻存试剂盒(低温)50次 MouseInsulin,INSELISAKit小鼠胰岛素(INS)试剂盒规格：96T/48T 气味结合蛋白2A抗体 HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein PACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原 0.5mgPACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原) MANF重组人 MANF / ARMET 蛋白 Protein CD47 Protein Human 重组人 CD47 蛋白 (Fc 标签) ACVR1 Protein Human 重组人 ALK-2 / ACVR1 蛋白 (His & Fc 标签) 人膀胱平滑肌细胞PACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原 0.5mgPACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原) CD47 Protein Human 重组人 CD47 蛋白 (Fc 标签) HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein ACVR1 Protein Human 重组人 ALK-2 / ACVR1 蛋白 (His & Fc 标签) MANF重组人 MANF / ARMET 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
|
