细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
人脑成纤维分离自脑组织；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂，沟或裂之间的隆起叫回，它们大大增加了大脑的表面积；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和中央沟。由于三沟裂之界隔，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的脑成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。 方法简介：
公司实验室分离的人脑成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的人脑成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 人脑成纤维细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 脑组织 | 产品货号 | YS-01X7399 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)试剂盒 ，英文名： BMP-7 ELISA Kit Porcine collagen type III (Col III) ELISA Kit 猪Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)试剂盒 1型脊髓灰质病毒(PV-1)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T CLIAKitforMK(HumanMidkine)ELISAKit人中期因子 体液脊髓过氧化酶(MPO)活性高质敏感比色法定量试剂盒20次 ELISAKitLH犬促黄体生成激素 小鼠胰淀素(Amylin)ELISAKit ELISA. 96T/48T 小鼠游离状腺原酸(Free-T3)ELISAKit ELISA. 96T/48T 小鼠白三烯C4(LTC4)ELISAKit ELISA. 96T/48T 小鼠(Cyt-C)ELISAKit ELISA. 96T/48T 1号染色体开放阅读框138抗体 小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA 试剂盒 96T/48T Dipeptidyl peptidase IV in two rats (DPP IV) ELISA Kit 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)试剂盒 HumanImmuneRNA,IrnaELISAKit 人免疫核糖核酸(Irna)试剂盒 96T/48T 进口分装 抗抗体IgM(间接法二步法) 硬组织固着液(Susa固着液)50毫升 MouseIerleukin1,IL-1ELISAKit小鼠白介素1(IL-1)试剂盒规格：96T/48T 脂肪酰基还原酶1抗体 TNF重组食蟹猴 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha 0.5mgHSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 热休克蛋白90α抗体 MGAT5重组人 MGAT5 / GGNT5 蛋白 Protein CD3E Protein Human 重组人 CD3e / CD3 epsilon 蛋白 (His & Fc 标签) FST Protein Mouse 重组小鼠 Follistatin / FST 蛋白 人脑成纤维细胞HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha 0.5mgHSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 热休克蛋白90α抗体 CD3E Protein Human 重组人 CD3e / CD3 epsilon 蛋白 (His & Fc 标签) TNF重组食蟹猴 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein FST Protein Mouse 重组小鼠 Follistatin / FST 蛋白 MGAT5重组人 MGAT5 / GGNT5 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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