细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
人角膜上皮分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下：①角膜是的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；②角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。 方法简介：
公司实验室分离的人角膜上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的人角膜上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 人角膜上皮细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 眼角膜组织 | 产品货号 | YS-01X7406 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 上皮细胞样 |
培养信息：
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 上皮细胞样 传代特性 可传2-3代 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠毒蕈碱型乙酰受体(M-AChR)试剂盒 ，英文名： M-AChR ELISA Kit Porcine growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 猪生长激素释放多肽(GHRP)试剂盒 植物源性成分(RBCL)核酸试剂盒 48T CLIAKitforLTB4(MouseLeukoieneB4)ELISAKit小鼠白三烯B4 体液总脂肪酶(lipase)活性比色法定量试剂盒20次 ELISAKitHSP-70鸡热休克蛋白70 小鼠正常T细胞表达和分泌因子(RAES/CCL5)试剂盒 96T/48T 小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)试剂盒 96T/48T 小鼠载脂蛋白H(Apo-H)试剂盒 96T/48T 小鼠载脂蛋白E(Apo-E)试剂盒 96T/48T 白介素22受体抗体 小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA 试剂盒 96T/48T Human exactable nuclear aigen (ENA) ELISA Kit 人可提取核抗原(ENA)试剂盒 Humannicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit 人腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)试剂盒 96T/48T 进口分装 CLIAKitfor(PINP)ELISAKit大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽 饮料糖精(saccharin)含量紫外光谱法定量试剂盒20次 MouseIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)试剂盒规格：96T/48T Rabbit Anti-Acetyl-Histone H3 (Lys9) antibody CD3D & CD3E重组食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein Matriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因 0.5mgMatriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗原 CD19重组人 CD19 / Leu-12 蛋白 Protein CD28 Protein Human 重组人 CD28 / TP44 蛋白 BDNF Protein Mouse 重组小鼠 / 人 BDNF 蛋白 人角膜上皮细胞Matriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因 0.5mgMatriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗原 CD28 Protein Human 重组人 CD28 / TP44 蛋白 CD3D & CD3E重组食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein BDNF Protein Mouse 重组小鼠 / 人 BDNF 蛋白 CD19重组人 CD19 / Leu-12 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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