细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

大鼠椎间盘纤维环分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形，有的可看到双层单位膜，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少，纤维环的生物性能就会减弱，椎间盘开始退变。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠椎间盘纤维环采用胶原酶-联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠椎间盘纤维环经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

小鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA 试剂盒

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)试剂盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗胶原蛋白抗体(CLA)试剂盒 96T/48T 进口分装

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG试剂盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)试剂盒规格：96T/48T

鸭γ干扰素(IFN-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠活化素A受体抗体(ACV-RAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠脑红蛋白(NGB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠血小板生成素(TPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

猪源产肠毒素性大肠杆菌K99抗体

小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human deoxyribonucleic protein aibody (DNP-Ab) ELISA Kit 人抗脱氧核糖核蛋白抗体(DNP-Ab)试剂盒

Humangasieceptor,GsaRELISAKit 人促胃液素受体(GsaR)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACA-IgMELISAKit大鼠抗心0脂抗体IgM

药品乙酸比色法定量试剂盒20次

Mouseoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit小鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)试剂盒规格：96T/48T

白细胞蛋白酶3抗体

IGFBP4重组食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

PDE9A重组人 PDE9A 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CBFB Protein Human 重组人 CBFB / CBF-beta 蛋白

KLK7 Protein Mouse 重组小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

大鼠椎间盘纤维环细胞Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

CBFB Protein Human 重组人 CBFB / CBF-beta 蛋白

IGFBP4重组食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

KLK7 Protein Mouse 重组小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

PDE9A重组人 PDE9A 蛋白 (His & GST 标签) Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。