细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

大鼠食管平滑肌分离自食管组织；食管可分为颈段、胸段和腹段，脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，肌层上1/3段为骨骼肌，下1/3为平滑肌，中段为骨骼肌和平滑肌混合组成。其中，肌纤维的排列方式分为内环形和外纵形两层。食管的蠕动是由食管平滑肌收缩严格控制，食管还有括约肌，位于环状软骨水平的，称为食管上括约肌；位于食管下端，一部分在膈上，穿过膈孔，另一部分在膈下的高压带，称为食管下括约肌。食管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠食管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠食管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

大鼠封闭蛋白3(CLDN3)试剂盒 ，英文名： CLDN3 ELISA Kit

Rat beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 大鼠β内啡肽(β-EP)试剂盒

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)试剂盒 进口分装

CLIAKitforDR-70TM(HumaumormarkerDR-70forlungcancer)ELISAKit人肺癌标志物DR-70

细胞皮尔斯(PERLS-DAB)非血红素铁(三价)强化染色试剂盒

RatHighdensitylipoprotein,HDLELISAKit大鼠高密度脂蛋白(HDL)试剂盒

载脂蛋白E   英文名称：   apolipoprotein/apoprotein E   英文缩写：   APOE

载脂蛋白P   英文名称：   Apolipoprotein P   英文缩写：   ApoP

血管生成素相关生长因子   英文名称：   Angiopoietin Growth Factors   英文缩写：   AGF

血管生成素-2   英文名称：   Angiopoietin-2   英文缩写：   ANG2

NT5DC2蛋白抗体

植物赤(GA)ELISA 试剂盒

Human ai cyclic ciullinated peptide aibody (CCP) ELISA Kit 人抗环胍肽抗体(CCP)试剂盒

PorcineCompleme3,C3ELISAKit 猪补体蛋白3(C3)试剂盒 进口分装

ADVIgMVII腺病毒IgMⅦ型(间接法二步法)

血液(NO)活性荧光定量试剂盒50次

MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit小鼠S100蛋白(S-100)试剂盒

GADD45G抗体

ASAH2重组小鼠 ASAH2 蛋白 (His 标签) Protein

Cholesterol 胆 100gCholesterol 胆

PAK3重组人 PAK3 蛋白 (His 标签) Protein

ACO1 Protein Human 重组人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 标签)

KIRREL Protein Mouse 重组小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 标签)

大鼠食管平滑肌细胞Cholesterol 胆 100gCholesterol 胆

ACO1 Protein Human 重组人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 标签)

ASAH2重组小鼠 ASAH2 蛋白 (His 标签) Protein

KIRREL Protein Mouse 重组小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 标签)

PAK3重组人 PAK3 蛋白 (His 标签) Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。