细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

大鼠卵巢成纤维分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的卵巢成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。卵巢成纤维细胞大多分布于卵巢表面，其主要特点和功能：①成纤维细胞在体外易于培养；②卵巢损伤后，成纤维细胞能修复和重塑卵巢；③能在卵巢炎症时有效控制炎症扩散。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠卵巢成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠卵巢成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

小鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA 试剂盒

Rat alpha fetoprotein / alpha fetoprotein (AFP) ELISA Kit 大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)试剂盒

Humanimmunosuppressiveacidicprotein,IAPELISAKit 人免疫抑制酸性蛋白(IAP)试剂盒 进口分装

Human16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1试剂盒人16α羟基雌同1(16-αOHE-1)试剂盒

真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒20次

MouseAquaporin2,AQP-2ELISAKit小鼠水通道蛋白2(AQP-2)试剂盒

蛋白酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样

碱性蛋白酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样

测试盒   紫外分光光度法   50管/48样

测试盒   可见分光光度法   50管/24样

G蛋白/鸟苷酸结合蛋白抗体

猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 试剂盒

People gathered protein (Agrin) ELISA Kit 人聚集蛋白(Agrin)试剂盒

Porcinesodium-glucosecoanspoer1,SGLT1ELISAKit 猪-葡萄糖共转运载体1(SGLT1)试剂盒 进口分装

CLIAKitforALP(Humanalkalinephosphatase)ELISAKit人碱性0酸酶

血液卵0脂乙酰转移酶(LCAT)活性比色法定量试剂盒20次

Mouseα1-microglobulin,α1-MGELISAKit小鼠α1微球蛋白(α1-MG)试剂盒

活化复制因子2抗体

CLEC14A重组小鼠 CLEC14A / EGFR-5 蛋白 (His 标签) Protein

CD146/MCAM 黑色素瘤细胞粘附分子CD146抗原 0.5mgCD146/MCAM 黑色素瘤细胞粘附分子CD146抗原

PHOSPHO1重组人 PHOSPHO1 蛋白 (His 标签) Protein

ALDH3A1 Protein Human 重组人 ALDH3A1 蛋白 (His 标签)

EPHA3 Protein Rat 重组大鼠 EphA3 蛋白 (His 标签)

大鼠卵巢成纤维细胞CD146/MCAM 黑色素瘤细胞粘附分子CD146抗原 0.5mgCD146/MCAM 黑色素瘤细胞粘附分子CD146抗原

ALDH3A1 Protein Human 重组人 ALDH3A1 蛋白 (His 标签)

CLEC14A重组小鼠 CLEC14A / EGFR-5 蛋白 (His 标签) Protein

EPHA3 Protein Rat 重组大鼠 EphA3 蛋白 (His 标签)

PHOSPHO1重组人 PHOSPHO1 蛋白 (His 标签) Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。