细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

大鼠口腔粘膜成纤维分离自口腔粘膜组织；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分。前借口裂与外界相通，后经咽峡与咽相续。口腔内有牙、舌等器官。口腔的前壁为唇、侧壁为颊、顶为腭、口腔底为黏膜和肌等结构。口腔借上、下牙弓分为前外侧部的口腔前庭（oral vestibule）和后内侧部的固有口腔（oral cavity proper）；当上、下颌牙咬合时，口腔前庭与固有口腔之间可借第三磨牙后方的间隙相通。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠口腔粘膜成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠口腔粘膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

小鼠半胱酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA 试剂盒

Rat aldosterone (ALD) ELISA Kit 大鼠固酮(ALD)试剂盒

Humanexacellularsignal-regulatedkinase,ERKELISAKit 人细胞外信号调节激酶(ERK)试剂盒 进口分装

HumanBrucellaAibodyIgG,BrucellaAbIgG试剂盒人菌抗体IgG(BrucellaAbIgG)试剂盒

植物组织叶绿体DNA萃取试剂盒10/20次

Humansolublevascularendothelialgrowthfactorreceptor-2,VEGFR-2/sFLK-1ELISAKit人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)试剂盒

木聚糖酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样

酸性木聚糖酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样

碱性木聚糖酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样

β-木糖苷酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样

CD71单克隆抗体

猪雌激素(E)ELISA 试剂盒

Human macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 人巨噬细胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)试剂盒

Porcinegasieceptor,GsaRELISAKit 猪促胃液素受体(GsaR)试剂盒 进口分装

CLIAKitforALP-B(MouseBone-specificAlkphaseB)ELISAKit小鼠骨特异性碱性0酸酶B

血液0酸二酯酶5(PDE5)活性酶连续循环定0比色法定量试剂盒20次

Mouseα-Glucosidase,a-GluELISAKit小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)试剂盒

甘油激酶抗体

TNFRSF13C重组大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 蛋白  Protein

Cyclin D2 周期素D2抗原 0.5mgCyclin D2 周期素D2抗原

TXN重组人 Thioredoxin / TXN / SASP 蛋白 Protein

ALDOB Protein Human 重组人 ALDOB / Aldolase B 蛋白 GST 标签

NT5E Protein Mouse 重组小鼠 CD73 / NT5E 蛋白 (His 标签)

大鼠口腔粘膜成纤维细胞Cyclin D2 周期素D2抗原 0.5mgCyclin D2 周期素D2抗原

ALDOB Protein Human 重组人 ALDOB / Aldolase B 蛋白 GST 标签

TNFRSF13C重组大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 蛋白  Protein

NT5E Protein Mouse 重组小鼠 CD73 / NT5E 蛋白 (His 标签)

TXN重组人 Thioredoxin / TXN / SASP 蛋白 Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。