ELISA免疫科学的诞生和发展

1．ELISA试剂盒免疫学的创立
19出纪科学医学产生的zui重要的因素之一是越来越多的人们接受了病菌致病的理论。1880年法国科学家巴斯德(Louis Pasteur)关于鸡霍乱(Pasreurella aviseptica,cholera)预防免疫作用的报道是科学免疫学诞生的重要标志。 他使用老化的霍乱病菌培养物，即已失去了致病力的霍乱病菌的作为疫苗、成功地防止了有致病力霍乱病菌的传染致病。1881年巴斯德更进一步证明杀死的霍乱菌以及病毒、炭疽菌（Bacillus anthracis）等都能成功地诱发免疫。为了纪念Jenner的伟大功绩，他将这类接种诱导免疫的制剂称为疫苗(vaccine，来自拉丁字vacca即牛的意思)。同时柯赫(Robert Koch)分离了炭疽病菌。他与巴斯德常常为炭疽病病原及预防而有颇多争论。1880年柯赫细菌病原研究中发现了结核菌(Tuberculosis bacillus)，并且研究了用疫苗来预防结核病的方法。他观察到现在知道的属于结核菌引发的迟发型超敏反应现象，并且建立了病原分离鉴定的法则——柯赫法则(Koch’s postulates)。由于上述开创性的工作，人们对于使用减毒或者杀死的病菌制作疫苗的方法以控制动物和人体传染性疾病树立了信心和希望。
以后的10多年的研究对免疫诱发物质有了更深入的认识。1888年Emile Ronx和Alexander Alexander Yersin发现了白喉杆菌(Diphtheria bacilli)的培养液中含有可溶性毒素，这种毒素能引发实验动物的白喉典型症状。1890年E．Adolf von Berhing等用白喉细菌培养液的过滤液，以非致病剂量注射动物，得到的动物抗血清具有中和毒素的作用，称为抗毒素(antitoxin)。这种抗毒素血清的中和能力又可通过转移血清的方法转移到未被免疫的功物身上，这就是被动免疫(passive immunization)。后来就把抗毒素物质称为抗体(anyibody)，把诱导抗体产生的物质称入抗原(antigen).他们还证明破伤风菌(clostridium tetain)外毒素的抗体也有中和毒素的作用。1890年PaulEhrhch证明植物毒亲蓖麻蛋白(rich)和红豆碱(abrin)也能诱发机体产生抗毒素，而且在体外试验中也证实能中和毒素，使红细胞免受毒素的伤害。这些实验结果对当时风糜医学界的E .A.von Behring抗毒素治疗方法无疑是极为重要的支持。在这期间还证明不但毒素能诱发抗体产生，非毒素物质如牛奶以及其他蛋白质类物质都能诱导机体产生特异抗体。这表明抗体的形成是机体的一种免疫应答现象。1894年R.F.J.Pfeiffer和J.J.B.V.Bordet从血清中分离出—类与抗体不同的成分，但能参与对细菌的破坏作用，这就是补体(complement)。 1896年M.von Gruger和H.E.Durham发现抗体能在体外特异性地凝集细菌。1897年R．Kaus发现抗原和抗体能形成沉淀，并用这种方法进行伤寒病菌的诊断，称为Widal试验。另外P.Ehrlich在此期间对白喉毒素和抗毒素进行了更直接的有重要意义的定量研究 .使当时zui重要的免疫治疗法更为合理化，他在1897年发表的关于白喉抗毒素的重要文献中对抗原抗体反应的定量研究，对抗体特异性与化学结构的关系以及补体与抗原抗体复合物结合的本质等理论和实践提出了重要解释、为免疫化学和血清学做出了重要的员献。他和梅契尼可夫以关于抗体形成的侧链学说共获1908年的诺贝尔生理和医学奖。
2．实验ELISA试剂盒免疫学的发展
进入20世纪以后，免疫学侧重向两个方面发展：①体液免疫(humoral immunity〕，着重研究免疫细胞分泌的产物——抗体；②细胞免疫(cellular immunity)，着重研究宿主对外来物质的的应答中完整细胞的生物学作用。这两个方向的发展使免疫学进入到实验免疫学的发展时期。
在体液免疫方面首先要提及的是P．Ehrlich的关于抗体形成的侧链学说。他提出细胞表面上预先存在一些受体，即侧链。受体能与毒素(即抗原)结合。细胞表面上产生的过多受体能以游离状态释放出来的便称为抗体。这是zui早提出的关于“抗体形成的理论和受体(recepter)的概念。虽然当时并没得到人们普遍接受,但他对现代免疫学理论的建立确有重要的影响。1901年K．Landstiner在研究抗红细胞抗体时发现人有同种凝集素系统(isoglutinin)，即AB0血型系统。1926年他与P．Lerine一起又发现了MN和P两种血型系统，1940年他与A．Wiener发现了Rh抗原，此后又发现厂许多其他的红细胞抗原。这些免疫血液(imunohematology)的研究对理论免疫学、法医学及人类种族关系的研究具有重要的意义，同时对输血、新生儿溶血等临床免疫的实践作出了重要的页献。
在抗原与抗体反应方面的实验研究还有20世纪20年代末30年代初关于抗原抗体定量沉淀反应和沉淀反应的“网格"结构理论。由于电泳技术的发展，E．A．Kabat和A.W.Tiselius确定了抗体分子的本质是γ—球蛋白。这些工作对血清学的应用起了推动作用，并为抗原抗体的关系及本质的理论研究打下了基础。
在ELISA试剂盒细胞免疫方面，早期开创性的工作应推梅契尼可夫。他生于俄国，1884在意大利从事海洋生物学研究，发现海星(starfish)幼体中含有吞噬细胞，能探索和清除外来物质。后来他在法国巴斯德研究所继续为创立他的吞噬细胞理论进行了大量研究工作，对细胞免疫理论的建立有着深远的影响。第二次世界大战期间许多基础学科研究有了重要的发展。1949年P．B．Mwdawar在皮肤移植的研究中发现移植排斥现象和免疫特异性反应的规律是相同的。1945年～1947年R.Oven报道了对两卵双生牛的研究，因为双生牛胚胎期共有循环系统而形成了血细胞嵌合体，这一对双胞胎之间没有移植排斥现象。1949年澳大利亚医生，病毒学家F．M．Burnet和F．Fenner一起修改新版的《the Production of Antibodies》一书中对R．Owen的发现进行了理论解释。他们指出在机体发育的一定时期内适应了的抗原就是“自身"，机体对它有耐受性，反之超过这个时期而末被适应的抗原就是“非自身"。免疫系统能识别它，它能活化免疫系统。1953年P．B．Medawar等又进一步证实了Burnet—Fenner理论，并把这种现象称为获得免疫耐受性(acquired immunological tolerance)。