PCR产物在室温下放一两天问题不大,但这不是长久之计。如果只是临时放一两个小时,不用担心,DNA很稳定,不会降解。 但要注意,室温下放久了(比如超过24小时),条带可能会开始变得模糊,降解风险会逐渐增加。如果环境温度高,降解会更快。 短期存放(比如一两天内要用),放4℃冰箱,能有效抑制酶活性,保持稳定。长期保存(几个月甚至更久),必须放-20℃或-80℃冷冻,这是标准做法。如果条件允许,用专用试剂盒纯化后再冻存,效果更好,能避免反复冻融带来的损伤。若需进一步延长PCR产物的保存时间,建议采取分装冻存的策略。将产物分装至多个无菌EP管中,每管存放单次使用量,这样可避免反复冻融导致的DNA断裂风险。分装时需注意管口短暂离心,防止液滴残留造成污染。对于高价值样本,可在缓冲液中加入适量甘油(终浓度5%-10%),这种冷冻保护剂能减少冰晶形成对DNA的物理损伤。 若实验室条件有限,可采用"盐乙醇沉淀法"临时保存:加入1/10体积3M醋酸钠和2.5倍体积预冷无水乙醇,混合后置于-20℃。该方法虽不如专业冻存稳定,但在断电等突发情况下能维持DNA完整性1-2周,使用时只需离心弃上清,70%乙醇漂洗后重悬即可。 值得注意的是,含有荧光标记的产物对光照敏感,应使用避光管存放,即便在4℃环境下也要用铝箔包裹。对于需要跨国运输的样本,推荐使用DNA稳定保存卡,这种载玻片大小的特制滤纸能室温保存核酸数月,特别适合野外采样场景。
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