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进口分装ELISA试剂盒洗涤方法区分和特点 |
点击次数:565 更新时间:2017-06-05 |
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进口分装ELISA试剂盒洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但是也决定着实验的成败。ELISA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中,洗涤是zui主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,严格按要求洗涤。 进口分装ELISA试剂盒洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪器外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种,过程如下: 一、浸泡式:1、吸干或甩干孔内反应液;2、用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后即甩去);3、浸泡,将洗涤液注满板孔,放置1-2分钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;4、吸干孔内液体应*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;5、重复操作3与4步骤,洗涤3-4次。在间接法中如本底较高,可增加洗涤次数或延长浸泡时间。微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的,非离子型洗涤剂含有疏水基团、亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借助疏水键 结合,从而削弱蛋白质与固相载体的结合,并借助于亲水基团和水分子的结合作用,使蛋白质回复到水溶液状态,从而脱离固相载体。 二、流水冲洗式:流水冲洗法zui初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲 击下不断滚动淋洗,持续冲洗2分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡2分钟,吸干即可。流水冲洗式洗涤效果更为*、更为简便快速。 进口分装ELISA试剂盒也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。 |
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