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1.标准品的稀释：进口分装ELISA试剂盒本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
80ng/L 5 号标准品 150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
40ng/L 4 号标准品 150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液
20ng/L 3 号标准品 150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液
10ng/L 2 号标准品 150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液
5ng/L 1 号标准品 150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl， 待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
大鼠磷酸化AKT蛋白（P-AKT）Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠磷酸化 AKT 蛋白（P-AKT）水平。用纯化
的大鼠磷酸化 AKT 蛋白（P-AKT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中
依次加入磷酸化AKT 蛋白（P-AKT） ，再与HRP 标记的磷酸化AKT 蛋白（P-AKT）抗体结
合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶
的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的磷酸化
AKT 蛋白（P-AKT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准
曲线计算样品中大鼠磷酸化AKT 蛋白（P-AKT）浓度进口分装ELISA试剂盒。
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