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酵母菌落PCR方法 |
| 点击次数：1122 更新时间：2012-02-13 |
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1．在冰上配制反应混合液：
2μl 10×菌落PCR缓冲液
1.2μl 25mmol/L MgCl2
0.4μl 10mmol/L dNTPs
10pmol 引物(每一种引物)
0.2μl Taq DNA聚合酶(5U)
加水到总体积为20μl
2．用移液器加微量细胞(约0.25μl)到PCR反应混合液中(20μl反应体积)
3．PCR循环参数：
94℃ 4分钟
94℃ 1分钟
55℃ 1分钟
72℃ 2分钟
35个循环
72℃ 10分钟
4．上全部样品进行琼脂糖电泳。 |
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