一、实验目的
1.熟悉掌握薄层层析的实验操作。
2.了解聚酰胺薄层层析法测定糖的原理和方法。 二、实验原理
用于层析的聚酰胺有两类，一类是锦纶66(尼龙)，另一类是锦纶6。在这两类材质中，都含有大量酰胺基团，故统称聚酰胺。聚酰胺以其－CO－或－NH－与极性化合物的－OH 或＝O 之间形成氢键，从而发生吸附作用。不同物质与聚酰胺之间形成氢键的能力不同。在聚酰胺膜上做层析分离时，流动相从薄膜表面流过，被分离物质在溶剂和薄膜之间按分配系数的大小，发生不同速率的吸附与解吸过程，从而使混合物得到有序的分离，使用显色剂显色，得到不同的Rf 值。 三、仪器和试剂
仪器
带密封盖的层析缸、聚酰胺板、毛细管、100℃的烘箱、电吹风、试管以及试管架等。
试剂
1.糖的标准溶液：木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10mg/mL 水溶液。
2.样品液：多糖的水溶液。
3.展开剂：⑴乙酸乙酯：乙酸：水＝2：2：1 ⑵：甲醇＝60：40(v：v)
4.显色剂：⑴25％~50％硫 酸 ⑵二甲苯1g，苯胺1mL 和85％磷酸5mL 融于50mL 丙酮中。 四、操作步骤
1.将聚酰胺板于100℃烘箱活化后冷却至室温，用毛细管点样，点样位置为从聚酰胺板下端1.5cm，两侧2～3cm，每个样品点相距1～1.5cm，斑点直径2mm。点一次吹干一次。
2.将展层剂于层析缸中平衡。数分钟后，将聚酰胺板放入。
3.当展层剂移至距上端2～3cm 时，取出聚酰胺板吹干，均匀喷上显色剂，于100℃显色。
4.15～30min 后从烘箱取出，测量Rf 值。
|
