所以任何的诊断ELISA试剂盒离不开的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。

一、加样
1、如果 样品稀释液少加或血清多加，都会引起本底增高。对于间接法来说，受上述两个因素影响更大。因为血清中受检的特异性IgG只*IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异性IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。这些非特异性的IgG均可以和酶标二抗发生反应而造成较高阴性本底或假阳性。如果加入的血清过多，高于规定的稀释倍数，极易造成高值阴性。反之，造成假阴性。
2、  如果加入的酶结合物过多或加在较高的孔壁上或孔口，也会引起本底升高或假阳性。
3如果血液未开始凝固或凝固不*时就强行离心分离血清，此时的血清中仍留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果。

二、  温育
1、  由于ELISA试剂盒在一定温度下的反应时间并不是反应的终点，温育时间过短、温度过低，易致显色不全；温育时间过长、温度过高，易致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*，产生阴性高值或假阳性反应。因此，要严格按规定的温度和温育时间进行。
2、  由于水浴较难将温度控制在稳定的范围，因此我们每次试验时应认真观察水浴箱的温度，尽量少开启水浴箱门，严格控制水浴的温度为37±0.5。同时，微孔板不可重叠放置，以保证传热均匀，各板的温度都能迅速达到平衡。
3、  由于ELISA试剂盒通常设定的反应温度为37度，在这个温度下温育一定时间，蒸发的水分会很多，对于整个反应体系来讲，各种反应物的浓度会不断地增加，这样必会导致反应zui后的值升高。因此温育时应贴上封板胶。

当标本采集保存不当产生溶血时，红细胞中的血红蛋白释放到血清中，血红蛋白具有过氧化物酶的性质，其通过吸附或“PP效应"（蛋白质间相互吸附的现象）结合后，可催化A、B液显色而造成假阳性1.2标本采集保存不当致细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，会产生假阳性反应；标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，易使间接法的试验本底加深。因此，ELISA试剂盒标本宜在新鲜时检测。
1、反复冻融血清会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存做多次检测，宜少量分装冻存。