小鼠肌红蛋白(MYO/MB)试剂盒ELISA操作流程: (1),待测样品孔中每孔加入待测样品100μ1,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理 组的细胞裂解液100μ1;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μ1。 (2)酶标板置4℃,包被过夜。 (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板 孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。 (4)阴性对照孔每孔加入PBS50μ1,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的免抗人AIF抗体工作液50μ1。 (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 (6)洗板,同(4)。 (7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗免抗体工作液100μ1。 (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 (9)洗板,同(4)。 (10)每孔加TMB显色液100μ1,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。 (11)每孔加100μ12mo1/LH2S04终止反应。 (12)分别测450nm吸光值V1和630nm吸光值V2,最终测得的0D值为两者之差(V1-v2),以减少由容器上 的划痕或指印等造成的光干扰。 (13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后,计算S/N值。S/N>2.1为阳性判定标准。
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