线状DNA清除剂 产品及特点 分离纯化环状DNA(质粒DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA和某些病毒DNA)的时候经常需要去除其中的基因组DNA污染,否则会对后续的PCR、WGA和测序等反应产生干扰。而基因组DNA一般都十分巨大,无论是线状(如真核细菌基因组DNA)还是环状(如细菌DNA),经过常规的DNA纯化过程都会变成20-50 Kb大小的线状DNA,而上述环状DNA一般还能保持环状构型。根据这一特点,本公司开发了专门用于去除线状DNA的本产品,它有如下优点: 1. 即开即用,不需用户花费大量时间去摸索各种条件。 2. 酶法去除线性DNA,使线状DNA污染降级几个数量级,不会干扰后续试验。 3. 柱式法纯化回收环状DNA,能快速清除残留酶,得到的DNA可直接使用。 4. 酶法处理不依赖于DNA序列,适于于任何线状DNA。而内切酶去除线状DNA则需要预先确知其在环状DNA上没有酶切位点。 5. 适用的环状DNA包括质粒DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA、环状病毒DNA等。 6. 得到的环状DNA可用于多种后续试验,尤其是WGA、PCR和测序等对污染敏感的试验。 规格及成分 成份 30次塑料袋包装 线状DNA清除剂溶液A 100 uL 线状DNA清除剂溶液B 30 uL 微量核酸沉淀剂(CAT#:50903-10) 2 mL 使用手册 1份 自备试剂 75%乙醇。 运输及保存 低温运输、-20℃保存, 有效期一年。 使用方法 1. 在干净塑料离心管中,按下表加入各成分(30 uL体系): 成份 样品 正对照 负对照 DNA(1-10 ug) (样品DNA) (自备环状DNA) (自备线状DNA) 溶液A 3 uL 3 uL 3 uL 剂溶液B 1 uL 1 uL 1 uL 补水到30 uL 补水到30 uL 补水到30 uL 2. 加200 uL石蜡油后,37℃保温16小时。注意:保温时间过短可能会形成短的DNA 片段,影响后续反应,所以保温16小时。必须加石蜡油,否则长时间保温期间水分会蒸发到管盖上。如果使用热盖打开的PCR仪则可以不加石蜡油。 3. 65℃加热灭活线状DNA清除反应的酶。 4. 如果使用了石蜡油,则需要将30 uL酶反应溶液转移到一个新的1.5 mL离心管中,再加入60 uL 微量核酸沉淀剂。如果没有使用石蜡油,则直接在30 uL酶反应溶液中加入60 uL 微量核酸沉淀剂。注意:微量核酸沉淀剂取用前需要充分摇匀。 5. 室温15000 g离心10分钟。 6. 弃上清后加自备的75%乙醇1 mL,振荡混匀。 7. 15000 离心3-5分钟,弃上清。 8. 再短暂离心后小心吸弃上清,沉淀即为回收的DNA沉淀,可溶于TE或水中。
|