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动物单个细胞的获得 |
| 点击次数：1759 更新时间：2013-01-08 |
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动物单个细胞的获得
组织的获得采用各种适宜的方法处死动物，取出组织块放入小烧杯中，用剪刀将组织块剪碎成1mm3大小，用吸管吸取Hanks溶液冲下剪刀上的碎块，补加3－5ml的Hanks溶液，用吸管轻轻吸打，低速离心，弃去上清液，留下组织块。组织的消化通过生物化学的方法将剪碎的组织块分散成细胞团或单细胞。根据不同的组织对象采用不同的酶消化液。如zui常用的有胰蛋白酶和胶原酶等。胶原酶是一种由细菌中提取的酶，对胶原和细胞间质有较强的消化作用，适用于消化纤维组织、上皮组织、癌组织等。其他的酶如链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等也可用于动物细胞的消化。EDTA消化传代细胞，常与胰蛋白酶使用。（1）向培养瓶中放入1－5mm3大小的组织块，加5ml2000单位/ml的胶原酶干液，zui终浓度为200单位/ml，pH=6.5。（2）36.5℃水浴4－48小时，无需摇动，中间可更换酶液一次。（3）当组织变软，分散于瓶底时，轻轻震荡即散成细胞团或单个细胞，小心倒出培养液。（4）800r/min离心5分钟，弃上清液，重新悬浮BSS溶液中，再离心一次。（5）加入培养液制成细胞悬浮液。
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