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小鼠主动脉内皮细胞​提取物培养操作

点击次数:1386 更新时间:2022-12-20

小鼠主动脉内皮细胞提取物培养操作:


1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。


2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。


1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。


2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。


3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。产品仅供科研使用


4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。


3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;


1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml yi酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。


2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。


3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.2)250g用于样品稀释。(WS)

卵黄琼脂培养基基础250g加入卵黄,用于厌氧梭状芽孢杆菌的分离培养

庖肉牛肉粒100g加入庖肉培养基基础(027140),用于厌氧菌的增菌培养和保存,还用于厌氧梭状芽孢杆菌的检验

庖肉培养基基础250g加入疱肉牛肉粒(027150),用于厌氧菌的增菌培养和保存,还用于厌氧梭状芽孢杆菌的检验。

麦芽浸膏汤250g用于酸性罐头食品商业无菌检验

锰盐营养琼脂250g用于嗜温和嗜热需氧芽孢杆菌的检测

酸性肉汤250g用于酸性罐头食品商业无菌检验

溴甲酚紫葡萄糖肉汤250g用于低酸性罐头食品商业无菌检验

血平板 (成品培养基)20个/盒用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验

哥伦比亚血平板(成品培养基)20个/盒用于一般病原菌的分离培养和溶血性细菌的鉴别

改良克氏双糖培养基250g用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的鉴定

硝酸盐蛋白胨水培养基250g用于鉴别绿脓杆菌分解硝酸盐产气试验

半固体琼脂250g供细菌动力观察、菌种保存,H抗原位相变异试验等。(美国FDA、SN、GB)

3%氯化钠三糖铁琼脂250g用于副溶血性弧菌的生化反应。(GB、SN)

血琼脂培养基基础250g加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验

尿素琼脂培养基基础250g用于鉴别肠道菌尿素酶试验

缓冲动力-硝酸盐培养基250g供产气荚膜梭菌动力和硝酸盐还原测定用


 

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