人转录因子AP-1试剂盒准备试剂与收集血样:
1. 收集标本:血清、血浆(EDTA )、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反复冻融。
2. 标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 400 0 p g/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管, 每 管加入标本稀释液 20 0ul 。在第一管中加入 400 0 p g/ml 的标准品溶液 2 00ul 混匀后用加样器吸出 2 00ul ,移至第二 管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 2 00ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。
4. 洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水) 结果计算与判断
1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0 pg /ml 为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。
3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 E2F1 含量 ,再乘上稀释倍数即可 。
试剂盒性能
1. 灵敏度 : 最小的E2F1 检测浓度小于 15 pg/ml。
2. 特异性: 可同时检测重组或天然的人 E2F1 。 不与 人其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性:板内、板见变异系数均小于8.9%。 人胚胎,皮肤,肌肉;M-20 人胚胎,皮肤,肌肉;M-22 人正常前列腺上皮细胞;RWPE-1 人羊膜细胞;WISH 人胚肺成纤维细胞;MRC-5 人胚胎肺成纤维细胞;WI-38 人胚肾细胞;293 [HEK-293] 人淋巴细胞;1301 人胚肺二倍体细胞;KMB-17 人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38] 人脐静脉内皮细胞(人膀胱癌细胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304] 人胚肺成纤维细胞;MRC-5 人羊膜细胞;WISH 人正常肝细胞;L-02 人胚肺细胞VA13细胞;WI-38 VA13亚系2RA 人胚肺二倍体细胞;HL 人肾皮质近曲小管上皮细胞;HK-2 人脐静脉内皮细胞;HUV-EC-C
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