α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)样本的前处理: 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离: ①称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆 器或研钵匀浆。 ②将匀浆600g,4℃离心5min。 ③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。 ④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的α-KGDH(此步可选做)。 ⑤在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W, 超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体α-KGDH活性测定。 测定原理:α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。自备实验用品及仪器:紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 磷酸化动力相关蛋白1抗体 DNA连接酶4抗体 二肽基肽酶6抗体 二氢叶酸还原酶抗体 有丝分裂控制样蛋白DIS3L抗体 有丝分裂控制蛋白样DIS3L2抗体 DOM3Z蛋白抗体 蓬乱蛋白2抗体 磷酸化蓬乱蛋白2抗体 转录下调蛋白1抗体 脱氢酶/还原酶家族成员2抗体 牙本质磷蛋白抗体 Dermokine β蛋白抗体 DPCR1蛋白抗体 表皮乳头源性蛋白6抗体 双特异性蛋白磷酸酶7抗体 双特异性蛋白磷酸酶26抗体 阿米洛利结合蛋白1抗体 S期激酶活化蛋白DBF4A抗体 着丝粒相关蛋白DSN1抗体 双皮层蛋白结构域蛋白DCDC2抗体 神经干细胞树突调节蛋白DAGLα抗体 对接蛋白4抗体 DULLARD蛋白抗体 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MNB抗体 无胸腺症相关蛋白DGCR6/迪格奥尔格综合征关键基因6抗体 朊蛋白DPL抗体 肌强直性营养不良蛋白激酶抗体 有丝分裂控制蛋白dis3抗体
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