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黄曲霉毒素M1(AFM1)ELISA检测试剂盒

点击次数:2867 更新时间:2012-04-19

黄曲霉毒素M1(AFM1)ELISA检测试剂盒

 

一、概要

黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液,动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物,也是一种强致癌物质。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的检测方法有液相色谱法(HPLC),薄层层析法(TLC)等。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。

本试剂盒是应用ELISA技术的新一代真菌毒素检测产品,操作时间短于60min,能zui大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素M1抗原,样本中黄曲霉毒素M1和此抗原竞争黄曲霉毒素M1抗体,同时黄曲霉毒素M1抗体与酶标二抗相结合,经TMB底物显色,样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素M1成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中黄曲霉毒素M1的含量。

黄曲霉毒素M1(AFM1)ELISA检测试剂盒

三、适用范围

可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1

四、使用单位需自备的设备及试剂

设备:

┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm

┅┅振荡器

┅┅离心机

┅┅天平:感量0.01g

┅┅微量移液器:单道 20ml200ml200ml1000ml、多道 250m

┅┅刻度移液管:25ml

┅┅洗耳球

┅┅三角瓶:100ml

┅┅聚苯乙烯离心管:10ml/50ml 

试剂

----去离子水

五、提供的材料与试剂

组份名称

酶标板

高浓度标准品(810ppb

AFM1酶标物

AFM1抗试剂

底物液A

底物液B

终止液

浓缩洗涤液(10×)

AFM1浓缩样品/标品稀释液(4×) 注:试剂盒检测范围0.05ppb~4.05ppb

黄曲霉毒素M1(AFM1)ELISA检测试剂盒

六、溶液的配制

七、牛奶、奶粉前处理

 

八、检测步骤

测定前应须知:

1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(2025℃)。

2、使用之后立即将所有试剂放回28℃。

3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。

5、黄曲霉毒素M1可致癌,应戴手套操作

九、结果判定

结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含黄曲霉毒素B1成负相关

1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.659,样本2的吸光度值为1.525,标准液吸光度值分别是:0ppb2.1010.05ppb1.7380.15ppb1.3130.45ppb0.8311.35ppb0.4694.05ppb0.262。则样本1的浓度范围是0.45ppb1.35ppb;样本2的浓度范围是0.05ppb0.15ppb 再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中黄曲霉毒素M1的浓度范围

2、定量分析

十、检测方法灵敏度、准确度、精密度

试剂盒检测下限:

0.05ppb

回收率:

牛奶:90±15%

奶粉:85±15%

精密度:

试剂盒的变异系数均小于10%

十一、注意事项

1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(2025℃)会导致所有标准的OD值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、每加一种试剂前需将其摇匀。

4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6、储存条件

  保存试剂盒于28℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。

7、试剂变质的迹象

发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。

8、在加入底物液A底物液B液后,一般显色时间为1520min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min(或更长)。反之,则减短反应时间。

9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,请加热溶解后使用。

10该试剂盒*反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化

十二、贮藏条件及保存期

   

  贮藏条件:保存试剂盒于28℃。

 

保存期:该产品有效期为12个月。

 

 

 

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