对虾桃拉病毒(TSV)荧光PCR检测试剂盒实验操作 1.模板制备(样本制备区) 建议使用配套水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒系列产品,具体过程详见产品说明书。 2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行) 剪下所需测试数的已含有反应液的PCR管,放置在室温待解冻后,离心30秒后揭开封口膜,向每管反应液中分别加入5μL模板,顺序为NG、待测样品模板、PG-TSV-P。盖好配套的PCR管盖后,涡旋混匀30s,离心1min,立即进行PCR扩增反应。 3. 扩增反应(扩增及产物分析区) 使用荧光定量PCR仪,荧光基团选择FAM,淬灭基团选择TAMRA。 结果分析判定 1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、 stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。 |