失败是成功的先导，失败是成功的基础。它指人唯有善于从失败中吸取经验教训，才能获得成功。 在进口分装ELISA试剂盒操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。今天为大家带来了一些实验经验总结，教您这样操作ELISA试剂盒实验不会失败。 1.有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法扼要的列出如下：
2.亲和素生物素：先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。
3.小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以 被其识别，所以保留抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。
4.脂类物质：可将其在有机溶剂中溶解后加入Elisa板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相表面。
5.应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间 的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易 吸附到固相载体表面。包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。 详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下*可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有 pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
6.但*选用什么，要依据试验详细来实践。常用封suo剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使 用(5%－10%)；还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。封suo就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲， 从而排斥ELISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封suo：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
7.在进口分装ELISA试剂盒洗板时会有一定误差，人为因素很大(当然有前提的用洗板机除外)，洗的不*或串了孔，对如斯敏捷的ELISA系统可是不小的影响。由于 聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干 扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板：可以说在ELISA操纵中，洗涤是zui主要的枢纽技术。 Integrin beta 5 磷酸化突触后密度蛋白95抗体 Integrin beta 7 磷酸化突触后密度蛋白93抗体 intestinal FABP/IFABP 磷酸化铁蛋白Fe65抗体 IQGAP1 磷酸化铁蛋白Fe65抗体 IRAK 磷酸化糖皮质激素受体抗体 IRAK4 磷酸化糖皮质激素调节激酶1抗体 IRF-1 磷酸化糖皮质激素调节激酶1抗体 IRF3 磷酸化糖皮质激素调节激酶1抗体 IRF4 磷酸化肽基脯氨酞顺反异构酶Pinl抗体 IRF7 磷酸化髓样细胞白血病-1抗体 IRGM 磷酸化髓鞘转录因子1抗体
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