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蛋白电泳(PAGE) |
点击次数:626 更新时间:2016-08-12 |
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聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂N,N,N,N—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫 酸铵(简称AP)或核黄素(即vitamin B2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE) S DS-PAGE是在要电泳的样品中加入含有SDS和β-巯基乙醇(或者DTT)的样品处理液,SDS可以断开分子内和分子间的氢键,破坏 蛋白质分子的二级和三级结构,β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构。SDS还与蛋白质结合使蛋白 质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时各种蛋白质分子本身的电荷*被SDS掩盖。这样电泳时,就消除了各种蛋白质本身电荷及结 构上的差异,电泳速度只是与蛋白质分子量有关。用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质图中的位 置,就能得知分子量. |
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