*代杂交俘获试验(hybrid capture test-Ⅰ，HC-Ⅰ) 为克服基因扩增技术的不足，几年前美国Digene公司开发出一种新的HPV DNA检测技术——*代杂交俘获试验(hybrid capture test-Ⅰ，HC-Ⅰ)。其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。HC-Ⅰ不需要基因扩增，利用两套单链全长RNA混合探针，可以检测5种低危型HPV(6, 11, 42, 43, 44)及9种高危型HPV(16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 56 )。理论上检测灵敏度是 50 000个HPV DNA拷贝。经过临床试验评价，HC-Ⅰ检测灵敏度低于PCR及其他基因扩增技术，但其特异度和阳性预测值却高于PCR。 第二代杂交俘获试验(hybrid capture test-Ⅱ，HC-Ⅱ) zui近Digene公司推出的杂交捕获二代试验( HC-II )更敏感，由原先的试管法改为96孔平板法，提高了工作效率，降低了成本，更适于大人群的筛查。该法同时能检测13种高危型HPV (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59和68型)，已得到世界范围的认可。Petry等[8] 对德国8466例患者经HC-Ⅱ检测，发现HC-Ⅱ检测宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅱ级的敏感性远较常规细胞学高，前者是97.8% ，而后者是43.5% ，而且HCⅡ检测CINⅡ的特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为95.3% 、10.9%和100%，与细胞学检测基本吻合。HC-Ⅱ检测方法的缺点是不能测定具体的HPV型别。此外，HC-Ⅱ作为杂交反应，存在交叉杂交的问题，即与不在混合探针中的其他HPV型起交叉反应引起假阳性结果而降低特异性[11]。ELISA试剂盒 第三代(hybrid capture test-Ⅲ，HC-Ⅲ) 杂交捕获Ⅲ(HC-Ⅲ)是Digene公司的新一代捕获杂交法，和HCⅡ一样也用RNA探针，但用一段带有生物素的寡核苷酸代替HC-II中的特异性抗体，将RNA DNA杂交体固定在链霉素包被的孔中。由于这段寡核苷酸与HPV DNA的另一段序列互补，从而减少了非特异性杂交造成的假阳性结果。而且这种检测方法能特异性地检测出靶序列的单个核苷酸的改变，从而使检测HPV基因型变异体成为可能。HC-Ⅲ也用混合探针，故也不能对HPV进行分型，加上的因素，使这种方法的研究和发展受到一定限制。 HC Express Array技术：Digene公司在杂交捕获法的基础上结合基因芯片推出了HC Express Array技术。这项技术利用芯片上固定的病毒不同亚型的特异性DNA探针，对病毒进行分型判断，此技术目前用于基因表型分析的研究，且该技术快速分型和定量的特点使其在HPV的分型检测中具有非常广阔的应用前景。ELISA试剂盒 小结：HC操作比较简单，基本步骤如下：①样本DNA双链解离为单链；②DNA单链与全长RNA探针结合为RNA-DNA杂交复合物；③包被在试管壁或微孔壁上的特异性抗体与RNA-DNA杂交复合物结合，使之固定；④结合有多个碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA杂交复合物结合，使信号放大；⑤碱性磷酸酶使酶底物发光，分光光度计测量发光强度后与标准值比较，通过碱性磷酸酶的含量确定RNA-DNA杂交复合物的含量。ELISA试剂盒 但是，HC也有一定的局限性，主要有：①检测结果阴性并不能排除HPV感染，因为可能存在病毒感染水平很低或者采样不正确导致的假阴性；②标本采集及保存有特殊的要求，必须应用Digene公司提供的器材及试剂，或者应用液基细胞学剩余标本；③不能区分HPV具体型别；④如果所得相对光单位值接近或者小于1. 0，则不能确定HPV感染。ELISA试剂盒 |
