(一)原理 琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase)是线粒体的标志酶，参与细胞有氧呼吸，其活性与线粒体活性平行，在癌细胞中其活性常减弱。琥珀酸脱氢酶使底物琥珀酸钠脱H+无色的四氮唑蓝(nitroblue tetrazolium，NBT)获得H+后被还原成蓝色。ELISA试剂盒 (二)材料 1．80％丙酮、PBS、二甲苯、甘油明胶、乙醇(50％、70％、95％、100％)。 2．NBT工作液PBS(O．2mol／L)10ml、0．2mol／L琥珀酸钠10ml、0．6mol／L NaHCO32ml、0．3mol／L CaCl20．2ml、0．03mol／L A1C130．2ml、NBT(1mg／ml)10ml，混匀后加水至40ml。 (三)方法 1．组织切片法 (1)80％丙酮于4℃固定组织切片标本2min。 (2)4 ℃条件下用PBS清洗2次，各2min。 (3)置于NBT工作液中，37℃孵育15~35min。 (4)用蒸馏水洗2次，各lmin。 (5)用丙酮再固定5min，以甘油明胶湿封或用梯度乙醇脱水(兼再固定)，二甲苯透明，树胶封片。若效果不理想，可试免去步骤(1)，并将PBS清洗条件该在室温下进行。ELISA试剂盒 (6)对照在工作液中不含底物或者在工作液中加入酶抑制剂丙二酸钠，使其终浓度为3．7mg／ml。 2．冰冻切片法 (1)冰冻组织切片标本制备。 (2)置于NBT工作液中，37℃孵育1h。 (3)用蒸馏水，晾干。 (4)2％甲基绿复染10min。 (5)水洗，晾干，油镜观察。 (四)结果 酶活性部位呈蓝色，对照标本不显色。ELISA试剂盒 |
