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质体DNA 酵解反应的方法步骤

点击次数:642 更新时间:2015-07-03

方法步骤:
1) 取两支1.5 mL微离心管,分别标示为 #1 与 #2 的后,依下表所顺序,
逐一加入酵解反应所需各项物质 (体积单位为 μL)。注意:应等所有成份加的后,再加入限制酶。

2) 以手指头轻弹微离心管,以均匀混合管中各项物质。ELISA试剂盒

3) 离心数秒后,放置于37℃恒温水槽作用1~2 h。

4) 请用这一段时间参照『基本操作技术』所描述的步骤准备一片1.2%洋菜胶体。
 Ethidium bromide 是强致癌物质,严禁戴着手套到处摸!

5) 自恒温水槽取出微离心管,离心数秒后暂存冰中备用。

6) 拟进电泳分析时,请拿出3 支1.5 mL 微离心管,分别标示为 #1, #2与 #3,并依下表所示在各离心管逐一加入适的DNA 与10×追踪染剂(体积单位为 μL)。

7) 把胶片移至电泳槽,注入适电泳缓冲液,以微移液器P20 逐一将样本
吸入注出数次使混合均匀,并小心注入胶片的样本槽中。ELISA试剂盒

8) 接好电极线以定电压100 V 进电泳,待追踪染剂移动至胶体三分的二处时,关闭电源,将胶体移至UV transilluminator box,以拍得相机拍照 。

 DNA泳动方向为 (-) 向 (+)。 此外,在UV transilluminator box上直接观察DNA色带时,没戴眼镜的同学应戴上护目镜或面罩,ELISA试剂盒以避免UV灼伤;含有ethidium bromide的洋菜胶体请丢至容器中!


 

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