斑点酶联免疫ELISA试剂盒吸附测定法(Dot ELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点，而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足，所以具有敏感性高，特异性强，被检样品用量少，节省材料，不需特殊仪器，结果判定简单易行和便于长期保存等特点。因此，该法自问世以来，以其*的优势，广泛应用于抗原抗体的检测和杂交瘤细胞的筛选等。(一) 原理DELISA的基本原理与常规ELISA试剂盒和免疫酶染色法基本相同，即将抗原或抗体首先吸附在纤维素薄膜(如硝酸纤维素膜，NC)表面，并保持其免疫活性，通过与相应的抗体或抗原和酶标记物的一系列免疫反应，形成酶标记抗原抗体复合物，在底物的参与下，结合物上的酶催化底物使其水解、氧化成另一种带色物质，沉着于抗原抗体复合物吸附的部位，呈现出肉眼可见的颜色斑点。试验的结果可通过颜色斑点的出现与否和色泽深度进行判定。DELISA常用的检测方法有直接法、间接法、双抗体夹心法、双夹心法和竞争法等。
1 材料
(1) 载体：硝酸纤维素膜022～045μm,Schleiche & Schucll或国产；混合硝酸纤维素膜022μm，上海医药工业研究院。
(2) 保温液及洗涤液：保温液为含01%BSA、005%Tween20 PBS(001mol/L,pH值74)；洗涤液为005%Tween20 PBS。
(3) 封闭剂：含1%BSA或4%蛋清或3%白明胶的PBS。
(4) 口蹄疫单抗：口蹄疫病毒A型单克隆抗体(AFMcAb)、O型多克隆抗体(OFPcAb，由O型标准病毒免疫BALB/c鼠制得)，由新疆畜牧科学院兽医研究所提供。
(5) A、O、C、ZB型口蹄疫标准抗原：由兰州兽医研究所提供。
(6) 冻干辣根过氧化物酶标记兔抗BALB/c鼠抗体：卫生部生物制品研究所。
(7) 底物溶液：3,3二氨基联苯胺50mg,005mol/L、pH值76 TrisHCl
缓冲液100ml，溶解后过滤，4℃避光保存。临用前按003%加入H2O2。
(8) 被检抗原的制备：水疱液可直接点样。ELISA试剂盒水疱皮用生理盐水洗净，晾干，称重，剪碎，加中性玻璃砂研磨，用生理盐水制成1∶5～1∶10悬液，室温浸泡2h，振摇后，1 500～2 000 r/min离心10min，上清液即可用于点样。
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